李斯特氏菌属现分为6个种，包括单核细胞增多李斯特菌、英诺克里斯特菌、绵羊李斯特、西尔李斯特、威尔斯李斯特菌及格氏李斯特（5）。

　　这种菌种的致病性各不相同。单核细胞增多李斯特菌是唯一对人致病的菌种；绵羊李斯特菌对动物治病，其它菌种没有致病性。人类李斯特氏菌病包括流产、脑膜炎、败血症和脑炎。高危人群包括孕妇、新生儿、免疫损伤患者及老年人（2，4）。单核细胞增多李斯特菌在环境中分布广泛，对未加工原料、部分加工食品及发酵食品具有潜在危害。

　　VIDAS单核细胞增多李斯特菌Ⅱ（LMO2）试验是一种快速过筛试验，将取代费时的传统方法，可直接筛选食品或环境样本中的单核细胞增多李斯特菌。

检测原理

　　VIDAS单核细胞增多李斯特菌Ⅱ分析是一种用自动化VIDAS仪器进行的酶联荧光免疫分析（ELFA）。固相容器（SPR）是一个类似于加样头的一次性装置，起固相及加样器的作用。SPR用单核细胞增多李斯特菌单克隆抗体包被。各种试剂均密封在试剂条内。

　　VIDAS系统自动完成全部实验程序。

　　将增菌肉汤加于试剂条上，在特定时间内样本在SPR内、外反复循环。样本中的单核细胞增多李斯特菌抗原与SPR内面的单核细胞增多李斯特菌抗体结合，未结合的样本则被洗去。标记有碱性磷酸酶的抗体也在SPR内外循环，并与SPR内面捕获的单核细胞增多李斯特菌抗原结合，最后洗去未结合抗体标记物。

　　在SPR中加入荧光底物，磷酸4-甲基伞型物。在SPR内面上酶催化下底物分解为具有荧光的产物4-甲基伞形酮。通过VIDAS的光扫描仪在450nm测定荧光强度。

　　实验完成时，计算机自动分析结果，得出检测值并打印出每份样品的结果报告。检测值与阈值相比较并给出解释（阳性，阴性）。

　　* 刺激性试剂

　　R36：对眼睛有刺激

• 最小加样量为0.5ml的加样器。
• 带滤器的消化袋。
• Half-Fraser 225ml(biomérieux 货号42048)
• Half-Fraser 225ml，300ml瓶装(biomérieux 货号42615)
• Fraser 肉汤 10ml (biomérieux 货号42072)
• Palcam 琼脂 (biomérieux 货号43559)
• Oxford琼脂 (biomérieux 货号43560)
• API李斯特试剂条（biomérieux 货号10300）
• Accuprobe单核细胞增多李斯特菌试剂（biomérieux 货号35900）

　仅限于专业使用

• 请将VIDAS系统放置在微生物检测专用房间。
• 请勿使用超出有效期的试剂。
• 不同批号试剂请勿混合使用。

• 如果包装袋破损，请不要使用SPR。
• 请勿使用破损的SPR(箔或塑料破损)。
• 试剂中含1g/l叠氮钠，该物质可与铅或铜管道反应形成爆炸性金属叠氮物。如果含叠氮钠的液体在这样的管道系统中处理，要用大量的水冲洗以避免形成金属叠氮物。
• 加有底物的比色杯含有刺激性试剂（二乙醇胺），参照以上的标记“R”和“S”。
• 试剂盒的所有试剂均为潜在生物危害材料。因此，通过可接受的方法来处理所有使用过的试剂和其它污染材料。
• 常规清洁和消毒VIDAS仪器，参见VIDAS操作手册有关步骤。

• VIDAS LMO2试剂盒存于2-8℃。
• 切勿冷冻试剂。
• 打开试剂盒后，SPR包装袋应密封完好，无破损，否则请不要使用SPR.。
• 为保持SPR稳定性，从包装袋取出SPR后应小心封好，并放入干燥剂，放回2-8℃贮存。
• 如果保存得好，余下的所有试剂在有效期内稳定性不变。

　　所有类型的食品：以无菌方法向225ml HalfFRASER 肉汤中加入25g(25ml)样本，在30±1℃消化和孵育24-26小时。之后取1ml肉汤接种于10ml FRASER 肉汤，30±1℃孵育24-26小时。

　　所有类型的食品：以无菌方法向225ml Half FRASER 肉汤中加入25g(25ml)样本，在30±1℃消化和孵育25±1小时。之后取1ml肉汤接种于10ml FRASER 肉汤，30±1℃孵育25±1小时。

　　孵育之后，取0.5ml肉汤加入VIDAS LMO2 试剂条样品孔中，其余肉汤放2-8℃保存，以备对阳性结果复查用

　　注：如果不能马上进行VIDAS检测，第二次孵育的肉汤可在2-8℃保存48小时。48小时后，最好将肉汤冰冻保存。

　　每一个新试剂盒在使用之前，首先要使用试剂盒中MLE卡向仪器（VIDAS 或mini-VIDAS）输入试剂规格（或出厂的校正曲线数据），否则方法将无法运行。每一盒试剂只需输入一次。

校正

　　每一个新试剂盒在输入MLE卡信息之后，需使用试剂盒内的校正液进行校正，以后每14天进行一次校正。此项操作可以提供仪器特定的校正曲线，对于在保存期限内可能出现的小的分析信号偏移可以进行补偿。

　　校正液S1在同一次测试中必须做双份（详见VIDAS操作手册）。校正值必须在设定的RFV(相对荧光值)值之内，否则，需重新校正。

• 冰箱中取出VIDAS LMO2试剂盒并使其恢复到室温（最少30分钟）。从试剂盒中取出所需试剂，并将未用的试剂放回2-8℃贮存。用封口条将SPR包装袋重新封好。
• 在LMO2试剂条的空白处，标上样本号。
• 输入所需的信息以便建立work list。键入“LMO2”至检测编号，再输入将要检测的实验号。

　　注：如果同时测定标准，则键入“S”（对于mini Vidas,先输入“S”然后输“1”）。

• 为提高结果的可重复性，使用前将标准、对照和样本充分混匀。为保证测试的正确性，请精确的吸取500μl的标准
• 分别吸取500μl样本、标准和对照加入样本孔中央。
• 依屏幕所示，将SPR和试剂条放入VIDAS相应的位置。核对位置以确保SPR上3个字母编码的颜色标记与试剂条相符。
• 根据VIDAS操作手册开始检测步骤。所有分析过程均由仪器自动完成。检测约需70分钟。

　　注：此检测方法与CAM相同，但与其它检测方法不同（LIS、SLM、ECO、SET、ICS和ICE）。因此LMO2与这些检测不能在同一区域进行。

　　检测完成后，结果由计算机自动分析。每份样品有两个荧光读数，第一个数值表示SPR未加入底物时，容器和底物的本底。第二个读数表示SPR内面的酶复合物与底物反应后的结果，该数值减去本底后则为相对荧光值（RFV）。

　　检测值则是由每份样本的RVF与标准对照值相比得出的。

检测值=样品RFV/标准RFV

　　打印的报告内容包括试验类型、样本号、日期和时间、试剂盒批号及有效期、每个样品的RFV、检测值和相应结果。

　　检测值低于阈值下限表明不能检出样本中含有单核细胞增多李斯特菌抗原。若大于（或等于）阈值上限则为阳性结果。阳性结果必须用标准培养方法对保存于2-8℃的增菌肉汤分离鉴定确认。

　　本底数值超过预定的分界值（提示有少量底物污染）时，结果无效。对此可用原始样本重新检测。

　　如果检测样本的试剂条没有标准，结果亦为无效。对此，可用相同批号的试剂条做双份标准，结果可根据新存储的标准重新计算。详见VIDAS操作手册。

　　将储存于2-8℃的LMO2测试结果阳性的肉汤转种于选择性的Palcam和Oxford培养基或李斯特显色琼脂。培养24或48小时后，挑选5个特征性的菌落按照标准的细菌学方法（API条，Accuprobe测试等）进行鉴定。

　　试剂盒附有阳性和阴性对照。每批新的试剂盒均应用阴性和阳性对照进行检测，以证明运输和贮存过程未影响其性能。根据自己实验室的常规程序检测对照品。提供的对照品可直接使用，但用前需充分混合再加入试剂条的样品孔。

　　阳性对照数值应在瓶签所示范围之内。如所测数值超过此范围，样本结果不能报告。

　　注：如果标准超过范围，检测值可根据另一个标准重新计算。详见VIDAS操作手册

方法的要求

　　VIDAS LMO2测试已经通过了大量食品的检测评估。由于食品种类繁多，制作过程多样，生物-梅里埃建议检查所要测试的食品成分以确认保其不影响LMO2测试结果的可靠性。

　　前增菌时，单核细胞增多李斯特菌和其他李斯特菌之间存在竞争作用（1，3），此种情况下，单核细胞增多李斯特菌将不能达到LMO2检测所要求的浓度。

　　以下为VIDAS LMO2评价试验结果：

　　特异度：32株单核细胞增多李斯特菌均被检测出。31株非单核细胞增多李斯特菌和13株非李斯特菌属的菌株未与之出现交叉反应。

　　检测限：介于每ml 104—105细胞。

　　比较行评估：以下是对303份样本同时使用VIDAS LMO2和ISO11290-1方法检测的结果;

　　对文中所列资料，作任何改变或修改均可影响结果。如果改变或修改，生物-梅里埃将不承担所有保证、许诺或意向，包括对商品的性能和正确操作的保证，以及对仪器间接或重大损坏负任何责任。

　　1.BEUMER R.R., TE GIFFEL M.C., ANTHONIE S.V.R. and COX L.J.,. The effect of acriflavine and nalidixic acid on the growth of Listeria spp. in enrichment media. Food Microbiology, 1996, 13, 137-148.

　　2.BOERLIN P., J. ROCOURT, F. GRIMONT, P.A.D. GRIMONT, C. JACQUET and J.C. PIFFARETTI. Listeria ivanovii subsp. londoniensis subsp. nov., Int. J. Syst. Bacteriol. 1992, 42 : 69-73.

　　3.CURIALE M.S. and LEWUS C. Detection of Listeria monocytogenes in samples containing Listeria innocua. J. of Food Protection 1994, 57, 1048-1051.

　　4.ROCOURT J., F. GRIMONT, P.A.D. GRIMONT and H.P.R. SEELIGER. DNA relatedness among serovars of Listeria monocytogenes sensu lato, Curr. Microbiol., 1982, 7 : 383-388.

　　5.SEELIGER H.P.R. and D. JONES Genus Listeria, in P. Sneath, N. Mair , M.E. Sharpe, J. Holt (eds.), Bergey's Manual of systematic Bacteriology,. Williams and Wilkins, Baltimore, MD. 1986, Vol. 2, 1235-1245.