李斯特氏菌现分为6个种。该菌的特点为不形成芽孢，短小、有动力的革兰氏阳性杆菌。触酶阳性，氧化酶阴性，水解七叶甙，发酵葡萄糖但不产生气体。李斯特氏菌可在较宽的温度和pH范围内生长并耐受高浓度氯化钠（5，4）。

　　李斯特氏菌广泛存在于自然界，可以致病或不致病。目前，已从未加工或加工食品(包括乳制品、肉类、蔬菜、水产品)及环境中尤其是食品加工环境中分离出李斯特氏菌。在人类李斯特氏菌可能引起流产、脑膜炎、败血症和脑炎。高危人群包括孕妇、新生儿、免疫损伤患者及老年人。

　　传统分析方法包括各种增菌方法，为获得最后结果，必须经过一些烦琐、费力操作及长时间培养。

　　VIDAS李斯特氏菌分析是用自动化VIDAS设备进行的酶联荧光免疫分析（ELFA）。

　　固相容器（SPR）是类似于加样头的一次性装置，用作固相及加样器之用。SPR用抗李斯特氏菌抗体包被。实验所需试剂均封闭在试剂条里。

　　VIDAS系统自动完成全部实验程序。将煮沸过的增菌肉汤加于试剂条上，样品将在SPR内定时循环，样品中的李斯特氏菌抗原与包被在SPR内侧的李斯特氏菌单克隆抗体结合，未结合的样本则被洗去。抗体-碱性磷酸酶复合物也在SPR内、外循环并与SPR壁上的李斯特氏菌抗原结合，最后洗去未结合复合物。

　　SPR中加入荧光底物，4-甲基-香豆素-磷酸酯，SPR壁上存留的酶将催化底物分解为荧光产物4-甲基-伞形酮。VIDAS的光扫描仪在450nm处自动测定荧光强度。

VIDAS李斯特菌试剂盒的组成（60人份）：

　　SRP在生产时以抗沙门氏菌单克隆抗体包被。每一SPR上均标有“LIS”。从包装袋中取出SPR后要及时封闭包装袋。

　　-最小加样量为0.5ml的加样器。

　　-水浴箱（100℃）或相当装置。

　　-带滤器的消化袋。

　　-Fraser 肉汤 225ml (biomérieux 货号42046)

　　-Half-Fraser 225ml(biomérieux 货号42048)

　　-Fraser 肉汤 20管 (biomérieux 货号42072)

　　-Palcam 琼脂 (biomérieux 货号43559)

　　-Oxford琼脂 (biomérieux 货号43560)

　　-UVM1肉汤

　　１.请将VIDAS系统放置在微生物检测专用房间。

　　２.请勿使用超出有效期的试剂。

　　３.不同批号试剂请勿混合使用。

　　４.试剂中含1g/l叠氮钠，该物质可与铅或铜管道反应形成爆炸性金属叠氮物。如果含叠氮钠的液体在这样的管道系统中处理，要用大量的水冲洗以避免形成金属叠氮物。

　　５.试剂盒的所有试剂均为潜在生物危害材料。因此，通过可接受的方法来处理所有使用过的试剂和其它污染材料。

　　６.常规清洁和消毒VIDAS仪器，参见VIDAS操作手册有关步骤。

　　１.VIDAS试剂盒存于2-8℃。

　　２.切勿冷冻试剂。

　　３.没用的试剂放回2-8℃。

　　４.在密封的SPR包装袋内，干燥剂上的指示剂应是兰色，如变成粉红色，则勿用贮存盒内其余SPRs。从包装袋内取出SPR后应再封好包装袋，这可使试剂保持稳定。

　　５.如果保存得好，所有试剂在有效期内稳定性不变。勿用超过失效期的试剂。

　　１.环境标本: 将环境标本加入10ml UVM1或Half-Fraser肉汤中，彻底混匀，30+1℃孵育40-48小时。

　　２.所有类型的食品：以无菌方法向225ml FRASER 肉汤中加入25g(25ml)样本，消化混匀，在30±1℃消化和孵育22+2小时。之后取0.1ml肉汤接种于10ml 不含柠檬酸铁氨的FRASER 肉汤，30±1℃孵育22+2小时。

　　注：柠檬酸铁氨在水浴中加热时会形成沉淀，沉淀会干扰VIDAS LIS的测定。建议在第二步增菌时使用不含柠檬酸铁氨的FRASER 肉汤。使用生物梅里埃经过专门研制的FRASER 肉汤可避免这一问题，得到VIDAS测试的最佳效果。

　　孵育之后，取1-2ml增菌肉汤加入试管中，在95-100℃水浴中加热15+2分钟。剩余增菌肉汤存于2-8℃，以便对VIDAS李斯特氏菌阳性检测结果进行确证。

　　１.环境标本: 将环境标本加入10ml UVM1或Half-Fraser肉汤中，彻底混匀，30+1℃孵育40-48小时。

　　２.奶制品和已加工食品：以无菌方法向225ml FRASER 肉汤中加入25g(25ml)样本，消化混匀，在30±1℃消化和孵育22+2小时。之后取1ml肉汤接种于10ml 不含柠檬酸铁氨的FRASER 肉汤，30±1℃孵育22+2小时。

　　３.海产品、未经巴斯德法消毒的奶制品、生肉/生禽肉和加工的肉/禽肉制品：开始的增菌与奶制品和已加工食品所述的方法相同。增菌后，取0.1ml肉汤接种于10ml 不含柠檬酸铁氨的FRASER 肉汤，30±1℃孵育22+2小时。

　　注：柠檬酸铁氨在水浴中加热时会形成沉淀，沉淀会干扰VIDAS LIS的测定。建议在第二步增菌时使用不含柠檬酸铁氨的FRASER 肉汤。使用生物梅里埃经过专门研制的FRASER 肉汤可避免这一问题，得到VIDAS测试的最佳效果。

　　孵育之后，取1-2ml增菌肉汤加入试管中，在95-100℃水浴中加热15+2分钟。剩余增菌肉汤存于2-8℃，以便对VIDAS李斯特氏菌阳性检测结果进行确证。

　　注：如果不能马上进行VIDAS检测，第二次孵育的肉汤可在2-8℃保存48小时。如超过48小时检测，最好将肉汤冰冻保存。

　　注意：以上方法如作改动，须在使用前确证。最后一步增菌必须在30±1℃孵育。

　　每一个新试剂盒在使用之前，首先要使用试剂盒中的MLE卡向仪器（VIDAS 或mini-VIDAS）输入试剂规格（或出厂的校正曲线数据），否则方法将无法运行。每一盒试剂只需输入一次。可以使用MLE卡自动输入或手动输入。

　　自动输入MLE卡信息时，卡正面向上放入塑料托盘，再将托盘箭头朝上放入仪器色测试仓，选“Calibration”菜单→“Read master lot” →选定放卡的测试仓。几分钟后仪器完成MLE卡的信息读入。

　　人工输入MLE看信息时，选“Manual Entry”菜单，再键入卡下方的字母和数字。输入后按<ENTER>确认。仪器会打印出输入的数据，请将其与MLE卡的数据对比。若不一致，再重新输入。输入失败时，屏幕会提示出错信息。详细的使用方法见VIDAS或mini-VIDAS操作手册。

　　每一个新试剂盒在输入MLE卡信息之后，需使用试剂盒内的校正液进行校正，以后每14天进行一次校正。此项操作可以提供仪器特定的校正曲线，对于在保存期限内可能出现的小的分析信号偏移可以进行补偿。

　　１.冰箱中取出VIDAS LIS试剂盒，取出所需试剂，并使其恢复到室温（最少30分钟）。将未用的试剂放回2-8℃贮存。用封口条将SPR贮存袋重新封好。

　　２.在LIS试剂条的空白处，标上样本号。

　　３.输入所需的信息以便建立work list.键入“LIS”至检测编号，再输入将要检测的实验号。标准必须在work list 的首位并作双份，随后是C1和C2（见操作手册）。

　　注：测定标准时，键入“S”（对于mini Vidas,先输入“S”然后输“1”）。

　　４.分别吸取500+50ml混匀的标准，对照或煮沸的样本（冷却后）加入试剂条样本孔中央。在VIDAS进行测试前必须将营养肉汤在100℃加热15分钟并放至室温。

　　５.依屏幕所示，将SPR和试剂条放入VIDAS相应的位置。核对位置以确保SPR上3个字母编码的颜色标记与试剂条相符

　　６.根据VIDAS操作手册开始检测步骤。所有分析过程均由仪器自动完成。检测约需45分钟。

　　注：此检测方法与SLM和ECO相同，可与这些检测在同一区域进行。

　　７.所有用过的SPRs和试条丢弃于适当的容器。

　　试剂盒附有阳性和阴性对照。

　　每批新的试剂盒均应使用阴性和阳性对照进行检测，以证明运输和贮存过程未影响其性能。每次校正时必须测定对照。对阳性和阴性对照分别标以C1和C2，仪器会自动识别。提供的对照品可直接使用，但用前需充分混合再加入试剂条的样品孔。

　　阳性对照数值应在瓶签所示范围之内。如所测数值超过此范围，样本结果不能报告。

　　注：如果标准品数值超过范围，检测值可根据另一个标准重新计算。详见VIDAS操作手册。

　　检测完成后，结果由计算机自动分析。每份样品有两个荧光读数，第一个数值表示SPR未加入底物时，容器和底物的本底。第二个读数表示SPR内面的酶复合物与底物反应后的结果，该数值减去本底后则为相对荧光值（RFV）。计算过程列于结果报告中。

　　每一样本的RFV值由VIDAS按以下公式计算：

　　打印报告内容包括实验形式、标本号、日期和时间、试剂盒的批号及失效期、每个样品的RFV、实验数据和结果的解释

　　实验数值低于下限提示不能检出样品含有李斯特氏菌抗原，若大于或等于上限则为阳性结果。阳性结果必须通过标准的培养方法证实。

　　将储存于2-8℃的LMO2测试结果阳性的肉汤转种于选择性的Palcam和Oxford培养基。37℃培养24或48小时后，挑选特征性菌落按照标准的细菌学方法进行鉴定（Palcam培养基可能会抑制某些李斯特氏菌株的生长）。

　　１.勿将不同批号的试剂或一次性装置混用。

　　２.进行VIDAS测试前试剂应恢复至室温。

　　３.用前应将标准液、对照液及样品充分混合，准确吸取0.5ml标准，以保证可重复性。

　　４.样本处理或保存不当可导致错误结果。

　　注：在VIDAS进行测试前必须将营养肉汤在100℃加热15分钟。

　　VIDAS LIS 可检测全部李斯特氏菌，包括：

　　L.monocytogenes单核细胞增多李斯特氏菌

　　L.innocua英诺克李斯特氏菌

　　L.ivanovii绵羊李斯特氏菌

　　L.seeligeri西尔李斯特氏菌

　　L.welshimeri威尔斯李斯特氏菌

　　L.grayi格氏李斯特氏菌

　　1994年6月17日，法国标准化协会（AFNOR）确认了VIDAS LIS测试可作为所有人类食品的李斯特氏菌快速测试方法。方法的确认是通过与NF EN ISO11290-1标准相比较。

　　BIO-12/2-06/94证书有效期至2002年6月9日。证书可从我们的试剂部获得。

　　文中所列资料，均为按本文所示方法操作所得，对该方法作任何改变或修改均可影响结果。如果改变或修改，bioMérieux 将不承担所有保证、许诺或意向，包括对商品的性能和正确操作的保证，以及对仪器间接或重大损坏负任何责任。

参考文献

　　１.BILLE J. and M. DOYLE Listeria and Erysipelothrix, A. Balows, W. Hausler Jr., K. Herrmann, H. Jsenberg, H.J. Shadomy (eds.), Manual of Clinical Microbiology, 5th ED, American Society for Microbiology, Washington, D.C., 1991, 287-292.

　　２.LOVETT J. Listeria Isolation, Supplement to FDA Bacteriological Analytical Manual, 6th Ed. Association of Official Analytical Chemists, Artington, VA., 1987, revised 1988, 1990, Ch. 29.

　　３.McCLAIN D. and W.H. LEE. Laboratory Communication, FSIS Method for the Isolation and Identification of Listeria monocytogenes from Processed Meat and Poultry Products.USDA/FSIS Microbiology Division, Beltsville, MD., 1989, No. 57.

　　４.ROCOURT J., P. BOERLIN, F. GRIMONT< C. JACQUET and J.C. PIFFARETTI Int. J. Syst. Bacteriol., 1992, 42. 69-73

　　５.SEELIGER H.P.R. and D. JONES. Genus Listeria, P. Sneath, N. Mair, M.E. Sharpe, J. Holt (eds.), Bergey’s Manual of systematic Bacteriology, Williams and Wilkins, Baltimore, MD., 1986, Vol. 2., 1235-1245.