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应用范围
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| VIDAS大肠杆菌O157 (ICE)测试，使用VIDAS系统作为大肠杆菌0157经选择性增菌后的一种自动化检测。 |
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产品说明
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VIDAS ICE 配合VIDASECO 使用。食品样本使用VIDAS ECO 检出大肠杆菌0157后，在使用VIDASICE进行简便易行的确证试验，由于肠道菌群的竞争作用，将VIDAS ECO筛选阳性的增菌液直接平板分离会导致大肠杆菌0157的过度生长。因此，通常需要将最少三个稀释度的增菌液（10-2，10- 3，10-4|）进行平板分离，操作繁琐且灵敏度低。
VIDAS ICE 对食品增菌肉汤中的大肠杆菌进行全自动的富集。此方法提高了选择性平板的分离效果，避免了多重稀释与平板分离。 富集过程在40分钟内完成。 |
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检测原理
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VIDAS大肠杆菌O157免疫浓缩试剂盒包括以下两种成分：
- 固相容器（SPR）：一个类似于加样头的一次性使用装置，起固相及加样器的作用。SPR内表面以抗大肠杆菌O157抗体包被。
- 试剂条含有实验所需的洗涤与释放液。
将增菌肉汤加入试剂条上，在特定时间内样本在SPR内、外反复循环。增菌肉汤本中的O157抗原与SPR内部的O157捕获抗体结合，未结合的成分洗涤清除。
最后一步是将捕获的大肠杆菌0157释放于特定孔中。释放的细菌接种于选择性平板分离。 所有检测步骤均自动由VIDAS仪器完成。 |
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VIDAS大肠杆菌O157免疫浓缩试剂盒成份（30人份/每盒）
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30个ICE试剂条 |
有十个孔，分别以箔封和纸签覆盖。 |
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30个ICE SPR |
SPR的内部以抗大肠杆菌O157抗体包被。每一根SPR均有标记。从包装袋中取出SPR后要将包装袋重新密封。 |
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1瓶标准液(6ml) |
碱性磷酸酶标记的多克隆抗体（兔）+1g/L叠氮钠+蛋白稳定剂 | |
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大肠杆菌O157免疫浓缩试剂条说明
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孔 |
试 剂 |
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1 |
释放孔，免疫浓缩液自动释放至本孔。 |
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中性缓冲液: TRIS HCl pH7.7 +Tween。 |
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3 |
释放液：乙酸钠和酶。 |
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4 |
样本孔：此孔加入500ml增菌肉汤或标准。 |
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5 - 7 - 8 - 9 |
洗涤液: TRIS-NaCl缓冲液(150mmol/l) pH7.6+ Tween +0.5g/l叠氮钠。 |
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6 |
前洗涤液: MOPS缓冲液(480mmol/l) pH7.8+ Tween +0.5g/l叠氮钠。 |
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10 |
底物孔：磷酸4-甲基伞形物+1g/l叠氮钠。此孔仅用于标准读取。 | |
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每个试剂盒中均有条形码卡，上面清楚的标明实验名称、批号、校正数据和标准值。 |
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未提供但应具备的设备
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加样器：最小加样量为0.5ml。 |
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注意事项
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１.增菌培养以及以后的免疫浓缩操作都可能含有活的致病菌，在操作时要严格遵守微生物规定程序。生物危害性试剂必须丢弃于适当的容器。
２.应把VIDAS仪器安装在微生物检验专用房间。
３.常规清洁和清洗VIDAS仪器，参阅VIDAS操作手册有关步骤。 ４.有些试剂中含有叠氮钠，该物质可与铅或铜管道反应形成爆炸性金属叠氮物。如果含叠氮钠的液体在这样的管道系统中处理，要用大量的水冲洗以避免形成金属叠氮物。 |
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保存
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１.VIDAS ICE保存于2-8℃。
２.勿冷冻试剂。
３.未用的试剂放回2-8℃。
４.在密封的SPR贮存盒内，干燥剂上的指示剂应是兰色，如变成粉红色，则勿用贮存盒内其余SPR。从包装袋内取出SPR后应再封好包装袋，这可使试剂保持稳定。
５.如果保存得好，所有试剂在有效期内稳定性不变。勿用超过有效期的试剂。 |
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质量控制
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每个试剂盒内均有标准，用以检查运输和贮存过程中可能出现的变化。提供的标准可直接使用，但用前需充分混匀再直接加入试剂条的第四孔。
每一批号的标准预期值应在瓶签所示范围之内。 |
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免疫浓缩方法
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VIDAS ICE用于经VIDAS ECO鉴定阳性的CT-Mac增菌肉汤。
注意：每批试剂盒都要进行标准的测定。同一批号的试剂每14天做一次标准。
１.从冰箱中取出VIDAS ICE试剂盒，取出所需试剂并放置室温（最少30分钟）。未使用的试剂放回2-8℃。
２.在ICE试剂条的空白处，标上样本号，勿覆盖条形码。
３.输入所需的信息以便建立work list.键入“ICE”至检测编号，再输入将要检测的实验号。注：如果同时测定标准，则键入“S”（对于mini Vidas,先输入“S”然后输“1”）。
４.吸取500μl增菌肉汤或旋转混匀的标准至试剂条4号孔中央。
５.依屏幕所示，将SPR和试剂条放入VIDAS相应的位置。核对位置以确保SPR上3个字母编码的颜色标记与试剂条相符
６.根据VIDAS操作手册开始检测步骤。所有分析过程均由仪器自动完成。检测约需40分钟。
注：此检测方法与沙门氏菌（ICS）相同，可在同一反应仓同时进行，但与LIS、SLM、ECO等不同。不可在同一反应仓同时进行。
７.打印报告内容包括试验类型、样本号，日期和时间、试剂盒的批号及有效期。标准的RFV值构成一个内部控制以检查免疫浓缩过程是否正确。对于其他样品，所报告的RFV值无意义。 注：ICE操作至此结束。免疫浓缩样品必须在ICE操作结束后30分钟内使用。 |
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大肠杆菌O157的检测
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从山梨醇麦康凯平板和选择性更强的含头孢克肟和亚碲酸钾的CT-SMAC平板上分离获得菌落（1，2）。 将灭菌棉签小心的插入ICE试条的第一孔，小心的涂布半个平板，然后划线接种另外半个平板。不同的棉签接种不同的平板。梅里埃建议使用带合成头的铝制棉签。 |
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- 在35-39℃孵育24小时，按照标准操作读取结果。
大肠杆菌O157通常为山梨醇发酵阴性的无色菌落，中央呈黑色，其他菌株因发酵山梨醇而呈粉红色。 |
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大肠杆菌O157的确证
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| 可疑菌落的确证应使用标准的血清学和生化方法。 |
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适用
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VIDAS ICE与VIDAS ECO配合使用，用于VIDAS ECO 检测阳性的食品样本的确证。 |
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参考文献
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１.Zadik P.M., Chapman P.A. & Siddons C.A. - Use of tellurite for the selection of verocytotoxigenic E. coli O157. J. Med. Microbiol. , 1993, 39, 155-158.
２.Vernozy-Rozand C., Mazuy C., Ray-Gueniot S., Boutrand-Loeï S., Meyrand A. and Richard Y. - Detection of E. coli O 157 in French food samples using an immunomagnetic separation method and the VIDAS E. coli O157.Letters in Applied Microbiology, 1997, 25 - in Press. |
